楸树优良品系Q235成熟种子为材料,以子叶为外植体,胚性愈伤诱导率为10.94%、增值系数:200%-300%/30 d,再生率:95%-100%,周期:90-100d。以农杆菌菌株EHA105为侵染菌株,以200 mg/L的利福平作为胚性愈伤遗传转化的抑制农杆菌生长的抑制剂,150 mg/L的卡那霉素或50 mg/L潮霉素作为转化后胚性愈伤的筛选临界浓度,在菌液OD600=0.60时候侵染,轻微摇晃20min,共培养48 h,侵染效率在94.5%,PCR检测的阳性植株率为93.3%(图4)。
图4. 楸树高效遗传转化体系(张恩亮,2018,硕士论文)
A-C胚性愈伤诱导,D胚性愈伤增值,E-I抗性胚性愈伤筛选及再生,J-K转基
因植株的GUS染色及PCR扩增,L:阳性植株移栽